Dopunski biomarkeri i specijalni testovi

Imunohistohemija koristi specifična antitijela za detekciju proteinskih markera direktno na tkivnom rezu. Time se u istom presjeku vidi i morfologija i molekularni fenotip tumora — najbrži i najšire dostupan dopunski test u patohistologiji.

Ključne primjene

• Određivanje porijekla tumora kod metastaza nepoznatog primarnog mjesta (CK7/CK20, TTF-1, GATA3, PAX8, S100/SOX10).
• Procjena proliferacije i gradiranja (Ki-67), te razlikovanje benignih i malignih lezija.
• Terapijski markeri: ER, PR i HER2 kod karcinoma dojke, PD-L1 za imunoterapiju.
• MMR proteini (MLH1, MSH2, MSH6, PMS2) kao surogat za MSI status i indikaciju za imunoterapiju.
• Screening za ALK i ROS1 preuređenja, s molekularnom potvrdom (FISH ili NGS) kada je nalaz pozitivan.

Uzorak: FFPE blok ili nebojeni rezovi. Rok: 3–5 radnih dana.

DNA metilacija je epigenetska oznaka koja se u tumoru raspoređuje u obrazac karakterističan za njegovo ćelijsko porijeklo. Taj „epigenetski otisak” je stabilniji od morfologije i zadržava se i u slabo diferenciranim ili malim uzorcima, pa omogućava klasifikaciju i tamo gdje mikroskopska slika nije jednoznačna.

Zašto je bitna za tumore centralnog nervnog sistema

WHO klasifikacija tumora centralnog nervnog sistema (2021) formalno uključuje metilacijske klase kao dijagnostički kriterij za više entiteta. Metilacijsko profiliranje najviše doprinosi kod embrionalnih tumora, ependimoma, glijalnih i glioneuronalnih tumora, meningeoma i intrakranijalnih sarkoma — grupa u kojima se morfološki slični tumori ponašaju klinički vrlo različito.

Šta nalaz sadrži

• Predviđenu metilacijsku klasu tumora i mjeru pouzdanosti (confidence score) te predikcije.
• Profil kopijskog broja (CNV) izveden iz istog niza — amplifikacije i delecije relevantne za dijagnozu.
• Status 1p/19q ko-delecije kod glioma.
• MGMT promotor metilaciju — prediktor odgovora na temozolomid.
• Dodatne promjene poput EGFR amplifikacije i CDKN2A/B delecije, kada su prisutne.

Kada je indicirano

• Pedijatrijski tumori CNS-a i tumori kod mladih odraslih osoba.
• Morfološki nejasni ili slabo diferencirani tumori bez jednoznačne dijagnoze.
• Neusklađenost između morfološkog i molekularnog nalaza.
• Potreba za tačnom entitetskom dijagnozom prije početka onkološke terapije ili uključivanja u protokol.

Uzorak: FFPE tkivo s dovoljnom količinom tumorske DNK (svježe zamrznuto tkivo također je prihvatljivo). Krv nije primjenjiva za ovu analizu. Rok: 10–15 radnih dana.

Imunohistohemija

Proteinski markeri na tkivnom rezu. Brzo, široko dostupno, prvi korak kod nejasne morfologije i terapijskih markera.

Metilacijsko profiliranje

Epigenetski profil cijelog genoma. Metoda izbora za tačnu klasifikaciju tumora CNS-a prema WHO 2021.

Sveobuhvatno genomsko profiliranje

Mutacije, fuzije, TMB i MSI za izbor ciljane terapije — kada je pitanje „koja terapija”, a ne „koji tumor”.

1. Konsultacija i odabir testa

Zajedno s kliničarem definišemo dijagnostičko pitanje i odabiremo dopunski test koji na njega može odgovoriti.

2. Dostava uzorka

Dostavljate FFPE blok ili nebojene rezove. Provjeravamo količinu i kvalitet tumorskog tkiva prije analize.

3. Obrada i analiza

IHC bojenja izvode se u partnerskoj laboratoriji, a metilacijsko profiliranje uz klasifikaciju metilacijskog profila kod specijalizirane laboratorije.

4. Integrisani nalaz

Patolog povezuje rezultate dopunskih testova s morfologijom i izdaje jedan, klinički upotrebljiv zaključak.

5. Klinička konsultacija

Nalaz zajedno prolazimo s kliničarem i, po potrebi, predlažemo dodatna testiranja.

Kada je imunohistohemija dovoljna, a kada treba metilacijsko profiliranje?

IHC je u većini slučajeva dovoljna za određivanje porijekla tumora i terapijskih markera. Metilacijsko profiliranje se dodaje kada je riječ o tumoru centralnog nervnog sistema koji se ni nakon IHC-a i standardnih molekularnih testova ne može jednoznačno klasificirati, ili kada WHO klasifikacija za taj entitet zahtijeva metilacijsku klasu.

Može li se test raditi iz arhivskog parafinskog bloka?

Da. I IHC i metilacijsko profiliranje rade se iz FFPE materijala, uključujući arhivske blokove. Kod starijih blokova i uzoraka s malo tumorskog tkiva prije analize procjenjujemo da li je materijal dovoljan.

Zamjenjuje li metilacijski profil histopatološku dijagnozu?

Ne. Metilacijska klasa je dodatni, ali vrlo snažan argument koji se integriše s morfologijom, imunohistohemijom i molekularnim nalazima u jednu konačnu dijagnozu, u skladu s principom integrisane dijagnoze WHO klasifikacije.

Koliko traje nalaz?

Imunohistohemijska bojenja gotova su u roku od 3–5 radnih dana. Metilacijsko profiliranje s klasifikacijom traje 10–15 radnih dana od prijema uzorka, uključujući interpretaciju patologa.

Da li metilacijsko profiliranje pokriva i tumore izvan CNS-a?

Klinički najbolje validirana i najšire prihvaćena primjena su tumori centralnog nervnog sistema. Za sarkome i pojedine druge grupe tumora klasifikatori se razvijaju i primjenjuju selektivno, pa se o svakom takvom slučaju odlučuje individualno u konsultaciji s kliničarem.

Dopunski testovi ne zamjenjuju patohistološku dijagnozu i ne koriste se samostalno. Odluka o testiranju donosi se u konsultaciji s kliničarem, na osnovu konkretnog dijagnostičkog pitanja.